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輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:IgG-Fc片段低親和力受體Ⅲb(FcγR3B)重組蛋白R(shí)ecombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)Juxtanodin蛋白(JN)重組蛋白R(shí)ecombinant Juxtanodin (JN)Kruppel樣因子4(KLF4)重組蛋白R(shí)ecomb

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2024-01-02
  • 訪  問(wèn)  量:2040

詳細(xì)介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱規(guī)格檢測(cè)方法貨號(hào)
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣微量法BK-S01321

商品介紹:

測(cè)定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽(yáng)性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽(yáng)性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長(zhǎng)期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

AHA3    AHA3抗體(擬南芥)    

Phospho-ATP1A1 (Ser23)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體    

phospho-ASK1 (Ser83)    磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體    

AADACL1    中性酯水解酶1抗體    

Astrocyte    人星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體    

Aldolase A    醛縮酶A抗體    

Annexin VI    膜粘連蛋白6抗體    

beta-Amyloid(25-35)    β淀粉樣肽(25-35)抗體    

Angiotensin I    血管緊張素I抗體    

Adrenomedullin    腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)    

Arfaptin 2    ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體    

AVPR2    加壓素受體2抗體    

ASC    凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體    

Afadin    絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體    

Antithrombin III     抗3抗體    

Serum albumin (3F4)    人血清白蛋白單克隆抗體    

CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)重組蛋白    Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1)    

C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)    

C-型凝集素域家族2成員C(CLEC2C)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)    

Dermokine蛋白(DMKN)重組蛋白    Recombinant Dermokine (DMKN)    

Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)重組蛋白    Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)    

Discs大同源物關(guān)聯(lián)蛋白5(DLGAP5)重組蛋白    Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)    

EGF樣域蛋白6(EGFL6)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 6 (EGFL6)    

EGF樣域蛋白7(EGFL7)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)    

Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白    Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)    

FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白    Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)    

輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法FMS樣Flt3)重組蛋白    Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3 (Flt3)    

GATA結(jié)合蛋白3(GATA3)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 3 (GATA3)    

GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 4 (GATA4)    

G蛋白偶聯(lián)受體家族C5組成員A(GPRC5A)重組蛋白    Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)    

HtrA肽酶1(HTRA1)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1)    

HtrA4(HTRA4)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)    

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